Определение общего микробного числа в питьевой воде. Общее микробное число в воде. Стандартный микробиологический анализ
|
При анализе воды надо контролировать не только содержание токсичных химических веществ, но и количество микроорганизмов, характеризующих бактериологическое загрязнение питьевой воды ОМЧ-общее микробное число.В воде централизованного водоснабжения это число не должно превышать 50 КОЕ/мл, а в колодцах, скважинах - не более 100 КОЕ/мл
Санитарно-микробиологическос исследование воды проводится в плановом
порядке с целью текущего надзора, а также по специальным эпидемиологичес-
ким показаниям. Основными объектами такого исследования являются:
Питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);
Питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;
Вода поверхностных и подземных водоисточников;
Сточные воды;
Вода прибрежных зон морей;
Вода плавательных бассейнов.
Основными показателями оценки микробиологического состояния питьевой воды согласно действующим нормативным документам являются:
1. Общее микробное число (ОМЧ) - количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.
Коли титр
- наименьший объем воды (в мл), в котором обнаружена хотя бы одна живая
микробная клетка, относящаяся к БГКП.
Индекс БГКП
- количество БГКП в 1 л воды.
3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
4. Число колифагов в 100 мл воды.
Определение ОМЧ позволяет оценить уровень микробиологического загрязнения питьевой воды. Этот показатель является незаменимым для срочного обнаружения массивного микробного загрязнения.
Общее микробное число - это число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать на питательном агаре при гемперазуре 37 °С и течение 24 ч колонии, видимые при двукратном увеличении.
При определении общего микробного числа 1мл исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри и заливают 10-12 мл теплого (44 °С) расплавленного питательного агара. Среду аккуратно перемешивают с водой, равномерно и
без пузырьков воздуха распределяя по дну чашки, после чего закрывают крышкой и оставляют до застывания. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Подсчитывают общее количество колоний, выросших в обеих чашках, и определяют среднее значение. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ
Определение БГКП
При этом определяют общие колиформные бактерии - ОКБ и термотолерантные колиформные бактерии - ТКБ.
ОКБ – грамамотрицатсльные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 48 часов. ТКБ входят в число ОКБ, облажают их признаками, но ферментирую при 44°С.Для определения энтеробактерий – метод мебранных фильтров или титрационный.
Микробное число - основными критериями оценки микробиологического состояния питьевой воды, исходя из действующих нормативных документов, является ОМЧ (общее микробное число), которое характеризует количество аэробных и анаэробных бактерий в одном миллилитре воды, образующихся за сутки при температуре 37 градусов, в питательной среде. Данный показатель является фактически незаменимым для быстрого обнаружения массового микробного загрязнения.
Для определения общего микробного числа один миллилитр исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают 10-15 мл тёплого (около 44 °С) питательного агара в расплавленном виде. Среду аккуратно смешивают с водой, равномерно и без воздушных пузырьков воздуха распределяют по дну чашки, после этого закрывают крышкой и оставляют в чашке Петри до застывания. Тоже самое проделывают в другой чашке. Посев в термостате инкубируют при температуре 37 °С в течение суток. Затем при двукратном увеличении под микроскопом подсчитывают общее количество колоний, выросших в двух чашках, и определяют среднее значение. В 1 мл питьевой воды не должно быть более 50 КОЕ.
Несоответствие воды , так же как и химическим, делает ее непригодной для питья. Если Ваш источник водоснабжения не защищен от прямого воздействия окружающей среды или коммунальные системы устарели или давно не чистились, то сделать микробиологический просто необходимо. От этого зависит Ваше здоровье и безопасность! Особенно это важно для тех, кто пользуется колодцем. – грунтовая, она на прямую контактирует с почвами, а значит, грозит «напоить» Вас и нитратами, и тяжелыми металлами, и аммиаком, и, конечно, вредными органическими веществами, которые попадают в почву в результате деятельности сельскохозяйственных ферм или угодий.
В таблице 1 представлены микробиологические показатели действующего норматива СанПиН 2.1.4.1074-01 для питьевой воды:
Таблица 1. Микробиологические нормативы для питьевой воды
Стандартный микробиологический анализ
Стандартный микробиологический анализ питьевой воды в МГУ включает определение трех показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных и термотолерантных колиформных бактерий.
Расширенный микробиологический анализ
Расширенный микробиологический анализ воды включает анализ пяти показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных бактерий, количества термотолерантных колиформных бактерий, титр колифагов и содержание спор сульфитредуцирующих бактерий.
Микробиологический анализ поверхностных водоёмов (пруды, реки, бассейны)
Часто на наших участках или поблизости имеются водоемы, где мы и наши дети с удовольствием любим провести время. Конечно, вода в данных водоемах не является питьевой, но ее безопасность для человека также, как и питьевая, регламентируется. В таблице 2 представлены микробиологические показатели действующего норматива по гигиеническим требованиям к охране поверхностных вод (СанПиН 2.1.5.980-00)
Таблица 2. Микробиологические нормативы для рекреационного водопользования, а также в черте населенных мест
Стандартный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы)
Микробиологический анализ воды, предназначенной не для питья, включает определение количества двух показателей: общих колиформных и колиформных термотолерантных бактерий.
Расширенный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы):
Помимо двух основных показателей мы предлагаем провести дополнительный анализ на содержание: колифагов, условно-патогенных дрожжей и микромицетов (частых спутников опортунистических заболеваний) и индекса самоочищения водоёма.
Определение бактерий рода Salmonella и рода Enterococcus
При значительном превышении нормативов СанПиН 2.1.5.980-00, а также возможном фекальном загрязнении водоёма, мы предлагаем провести анализ на наличие возбудителей кишечных инфекций (род Salmonella и Enterococcus).
Глоссарий
Общая микробная численность (ОМЧ)
Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза. Данный индикатор выявляет потенциальных бактерий, способных причинить вред здоровью человека.
Общие колиформные бактерии (ОКБ)
Общие колиформные бактерии (ОКБ) - грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37+1) °С в течение (24-48) часов. Многие представители данной группы являются микроорганизмами нормальной микрофлоры желудка, поэтому превышение данной группы микроорганизмов может говорить о возможно антропогенном (в том числе и фекальном) загрязнении воды.
Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ)
Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5) °С в течение 24 часов. Также, как и ОКБ являются индикаторной группой, однако более устойчивые в окружающей среде: вот почему обнаружение данной группы микроорганизмов в воде может говорить об однозначном загрязнении ее продуктами жизнедеятельности человека.
Колифаги
Колифаги, определяемые стандартным методом (МУК 4.2.1018-01), являются вирусами кишечной палочки (Escherichia coli) и рассматриваются эпидемиологами как дополнительный, а порой и более чувствительный, метод в определении загрязнения воды микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы, и в частности колифаги, более устойчивы к окружающей среде, чем их бактерии-хозяева. В связи с этим, наличие колифагов может служить достоверной меткой о более давнем фекальном загрязнении источника воды. Показана прямая корреляция между содержанием колифагов в воде и опасных для человека энтеровирусов, поэтому наличие колифагов в воде может говорить о вирусном заражении источника. Действующий нормативный документ (СанПиН 2.1.4.1074-01) подразумевает отсутствие колифагов в 100 мл воды.
Споры сульфитредуцирующие клостридии
Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, являющиеся дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения водоема. В отличие от относительно неустойчивых колиформных и термотолерантных колиформных бактерий, споры клостридий могут сохраняться в водоемах долгое время. Клостридии встречаются в кишечнике человека и домашних животных, однако, при попадании с водой в большом количестве могут вызвать пищевые отравления. К сульфитредуцирующим клостридиям относятся в том числе и опасные для человека клостридии (Clostridiumbotulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), вызывающие тяжелейшие заболевания. Согласно действующему нормативу (СанПиН 2.1.4.1074-01) споры клостридий должны отсутствовать в 20 мл воды.
Условно-патогенные дрожжи и микромицеты
К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов, способных сапротрофно расти при 37 °С. В нее входят такие представители, как Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые являются частым фактором оппортунистических заболеваний человека, вызывая кандидозы (грибковые заболевания кожи), молочницы и проч. Другие организмы микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) могут являться активными сенсебилизаторами аллергических реакций, а иногда и самими аллергенами. В РФ не нормируется вода по плесеням и дрожжевым организмам в воде.
Определение индекса самоочищения (из МУК 4.2.1884-04)
Общее число микроорганизмов не нормируется в воде водоемов в зонах рекреаций, поскольку уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.
Однако при выборе нового источника водоснабжения или места рекреации в воде водоёмов дополнительно следует определять общую микробную численность, вырастающую:
- при температуре 37 °С в течение 24 часов;
- при температуре 22 °С в течение 72 часов.
Полагается, что:
- ОМЧ при 37 °С представлена большей частью алохтонной микрофлорой (внесенную в водоем в результате антропогенного загрязнения, в том числе фекального);
- ОМЧ при 20-22 °С представлена, помимо алохтонной, аборигенной микрофлорой (естественной, свойственной для данного водоёма).
Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процесса самоочищения. При завершении процесса самоочищения коэффициент ОМЧ 22 °С/ ОМЧ 37 °С. В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп близки.
Показатель позволяет получить дополнительную информацию о санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах самоочищения.
Общее микробное число – это количество бактерий, имеющихся в определенном объеме исследуемого материала. Этот показатель служит лишь для приближенных относительных оценок. Методы определения ОМЧ можно разделить на 2 группы:
прямой подсчет бактерий в счетных камерах, под обычным или фазово-контрастным микроскопом,
количественный посев на плотные питательные среды. Менее точный, так как выявляет только группы микроорганизмов, растущих при заданном режиме.
Санитарно-показательные микроорганизмы (спм)
Санитарно-показательными являются микроорганизмы, указывающие на загрязнения внешней среды выделениями человека или животных. Обычно это комменсалы естественных полостей. При выявлении СПМ производится их количественное определение, результаты исследований выражаются в двух величинах: индекс СПМ (это количество СПМ, обнаруженное в определенном объеме или количестве исследуемого объекта, для определения которого используют метод мембранных фильтров и метод бродильных проб) ититр СПМ (это наименьший объем исследуемого материала, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ) – величина, обратная индексу. Например:
coli-titr = -------- (см. таблицу)
Основные характеристики СПМ.
СПМ должны постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделятся в окружающую среду.
СПМ не должны размножаться во внешней среде.
Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть несколько больше, чем у патогенных организмов.
У СПМ не должно быть во внешней среде двойников, с которыми их можно перепутать.
СПМ не должны изменяться во внешней среде.
Методы идентификации и дифференциации СПМ должны быть простыми.
СПМ воды – кишечная палочка, воздуха – зеленящий стрептококк, почвы – клостридиум перфрингенс, молока – кишечная палочка.
СПМ делят на 3 группы:
Группа А включает обитателей кишечника человека и животных, их расцениваются как индикаторы фекального загрязнения (эшерихии, энтерококки, протеи, сальмонеллы, сульфитвосстанавливающие клостридии, термофилы, бактериофаги, бактероиды, синегнойная палочка, кандиды).
Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки, их расценивают как индикаторы орального загрязнения (стрептококки, стафилококки).
Группа С включает сапрофитные микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения (бактерии-протеолиты, бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, грибы, актинимицеты, синезеленые водоросли).
Патогенные микроорганизмы (пм)
Обнаружение ПМ во внешней среде производится:
Путем прямого посева на питательные среды.
Путем посева после предварительной концентрации микроорганизмов с помощью фильтрации, центрифугирования, осаждения коагулянтами и т.д.
Идентификация ПМ производится согласно общепринятым схемам.
Согласно ГОСТу “патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в питьевой воде и пищевых продуктах”.
Домашнее задание к занятию №1
Клиническое проявление инфекций, вызванных клебсиеллами и протеем. Патогенетические особенности.
Классификация клебсиелл и протеев
Морфологические, культуральные, биохимические особенности клебсиелл и протеев.
Методы лабораторной диагностики.
Специфическая профилактика и лечение инфекций, вызванных клебсиеллами и протеем.
Предмет санитарной микробиологии.
Задачи санитарной микробиологии.
Принципы и методы санитарно-микробиологических исследований.
Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах и общем микробном числе.
Требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам.
Классификация санитарно-показательных микроорганизмов.
Общее микробное число
Общее микробное число отражает общий уровень содержания бактерий в воде, а не только тех из них, которые образуют колонии, видимые невооруженным глазом на питательных средах при определенных условиях культивирования. Эти данные не имеют большого значения для обнаружения фекального загрязнения и не должны считаться важным показателем при оценке безопасности систем питьевого водоснабжения, хотя внезапное увеличение числа колоний при анализе воды из подземного водоисточника может служить ранним сигналом загрязнения водоносного горизонта.
Общее микробное число полезно при оценке эффективности процессов водоочистки, особенно коагуляции, фильтрации и обеззараживания, при этом основная задача заключается в поддержании их количества в воде на возможно более низком уровне. Общее микробное число может быть использовано также для оценки незагрязненности и целостности распределительной сети и пригодности воды для производства пищевых продуктов и напитков, где число микроорганизмов должно быть низким для сведения до минимума риска порчи. Ценность данного метода заключается в возможности сравнения результатов при исследовании регулярно отбираемых проб из одной и той же системы водоснабжения для обнаружения отклонений.
Общее микробное число, т. е. число колоний бактерий в 1 мл питьевой воды, не должно быть более 50.
Вирусологические показатели качества воды
К вирусам, вызывающим особое беспокойство в связи с передачей водным путем инфекционных заболеваний, относятся главным образом те, которые размножаются в кишечнике и в больших количествах (десятки миллиардов на 1 г кала) выделяются с фекалиями зараженных людей. Хотя репликации вирусов вне организма не происходит, энтеровирусы обладают способностью к выживанию во внешней среде в течение нескольких дней и месяцев. Особенно много энтеровирусов в сточных водах. При водозаборе на водоочистных сооружениях в воде обнаруживают до 43 вирусных частиц на 1 л.
Высокая выживаемость вирусов в воде и незначительная заражающая доза для человека приводят к эпидемическим вспышкам вирусного гепатита и гастроэнтерита, но через источники водоснабжения, а не питьевую воду. Однако потенциально такая возможность сохраняется.
Вопрос о количественной оценке допустимого содержания вирусов в воде очень сложен. Сложно и определение вирусов в воде, особенно питьевой, так как возможен риск случайного загрязнения воды при отборе проб. В Российской Федерации согласно СанПиНу оценку вирусного загрязнения (определение содержания колифагов) проводят по подсчету числа бляшкообразующих единиц, создаваемых колифагом. Прямое определение вирусов очень сложно. Колифаги присутствуют совместно с кишечными вирусами. Количество фагов обычно больше, чем вирусных частиц. По своей величине колифаги и вирусы очень близки, что важно для процесса фильтрации. Согласно СанПиНу в 100 мл пробы бляшкообразующих единиц быть не должно.
Простейшие
Из всех известных простейших патогенными для человека, передающимися через воду, могут быть возбудители амебиаза (амебной дизентерии), лямблиоза и балантидиаза (инфузории). Однако через питьевую воду возникновение данных инфекций происходит редко, лишь при попадании в нее сточных вод. Наиболее опасен человек, являющийся источником-носителем резервуара цист лямблий. Попадая в сточные и питьевые воды, а затем опять в организм человека, они могут вызвать лямблиоз, протекающий с хроническими диареями. Возможен смертельный исход.
По принятому нормативу цист лямблий в питьевой воде объемом 50 л наблюдаться не должно.
Должны отсутствовать в питьевой воде и гельминты, а также их яйца и личинки.
СТАЙЛАБ предлагает тест-салфетки, тест-подложки и микробиологические штампы для определения ОМЧ и КМАФАнМ в различных пробах.
Общее микробное число (ОМЧ) является показателем для оценки общей бактериальной обсемененности. Это один из основных показателей, определяемых в ходе санитарно-микробиологических исследований. Это общее количество всех , находящихся в 1 мл или 1 см 3 пробы. Его значение выражают в колониеобразующих единицах: КОЕ/мл или КОЕ/см 3 . Колониеобразующая единица - это микроорганизм, образующий колонию в ходе размножения.
Считается, что чем выше ОМЧ, тем вероятнее присутствие в исследуемом объекте патогенов. В действительности на величину этого показателя влияют также сапротрофы, которые препятствуют развитию патогенных микроорганизмов, и ОМЧ однозначно соотносится лишь со степенью загрязненности объекта органическими веществами. Однако это важный санитарный показатель, поскольку он позволяет оценить чистоту и качество дезинфекции воды, поверхностей, оборудования и других объектов окружающей среды.
В пищевых продуктах обычно определяют количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных организмов (КМАФАнМ). Аэробные микроорганизмы - это живые существа, которым для существования необходим кислород. Факультативные аэробы могут жить и размножаться как в присутствии кислорода, так и без него. Иногда термин КМАФАнМ используют в качестве синонима ОМЧ. Его значение выражают в КОЕ/г или КОЕ/см 3 . КМАФАнМ позволяет оценить условия хранения и транспортировки пищевых продуктов. ОМЧ и КМАФАнМ неприменимы для оценки продуктов, обладающих собственной микрофлорой, к примеру, молочнокислых продуктов, пива, кваса и др.
Для определения ОМЧ и КМАФАнМ на среду высевают пробу исходной концентрации и несколько ее последовательных десятикратных разведений в стерильной воде или растворе. Это необходимо на случай, если в исходной пробе очень много микроорганизмов, и различить колонии, образованные ими, будет невозможно. Для определения КМАФанМ рекомендуем использовать тест-салфетки . Определить ОМЧ на твердых поверхностях можно также методом отпечатка с помощью микробиологических штампов.
С помощью определения ОМЧ можно также оценивать эффективность дезинфектантов. Для этого необходимо использовать среду с веществами, нейтрализующими их действие, поскольку при снижении эффективности дезинфектанты не уничтожают микроорганизмы, а лишь угнетают их рост. На обычных средах такие организмы не успевают образовать колонии. Для такой оценки предназначены микробиологические штампы .
В Российской Федерации и странах Таможенного Союза параметры ОМЧ и КМАФАнМ не должны превышать установленных ТР ТС «О безопасности пищевой продукции» и другими техническими регламентами Таможенного Союза. С актуальной законодательной информацией можно ознакомиться на сайте
